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基因應用:鴿子性別鑒定

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家鴿性別鑒定專用試劑盒使用說明書

 

試劑盒規格

 100個反應    200個反應    500個反應    1000 個反應   2000 個反應  

5000個反應

 贈品

試劑盒成分

1、A液 (室溫條件下儲藏)

2、B液 (4oC儲藏)

3、C液 (-20oC儲藏)

4、D液 (室溫儲藏)

5、瓊脂糖

6、E液(室溫儲藏,避光)

保質期:暫定4個月

 

使用說明書

1、家鴿基因組DNA模板的制備(血液法)

1.1 按需要進行性別鑒定的鴿子數,準備相應的1.5ml EP管個數。

1.2用100l移液器在每個EP管中分別加入20l A液。

1.3 在鴿子翅膀的腹側靜脈豐富處用大頭針刺破靜脈,出血后,用2.5l移液器吸取1l血液(注意如果吸頭外沾有血液外需要用吸水紙吸去,確保取樣量準確),移入每個EP管中,加樣時以接觸到A液的液面為準。棄去槍頭。吸取新的樣本時請注意更換槍頭。合上EP管蓋子后,在EP管上用記號筆寫上相應鴿子的編號,然后立即將樣品放在自制的冰上。

注意:在采集下一只鴿子時,請更換大頭針。大頭針經過自來水清洗處理,晾干后可重復使用。

1.4采集完后,將盛有血樣的EP管放入預熱的95攝氏度水浴鍋中,熱激10分鐘。

1.5 用10l移液器將10l B液移入新的8聯PCR管內。

1.6 用2.5l移液器逐一從1.3中準備好的含血液的1.5ml EP管中吸取1l稀釋的血液分別放入8聯PCR管內,加樣時以接觸到B液液面為準。棄去吸頭。吸取新的樣本時請注意更換槍頭。然后對8聯PCR管做好相應標記,以對應相應的鴿子編號。

1.7 將PCR管蓋上蓋上后放入PCR儀,按以下程序進行孵育:65oC 30分鐘、95oC 5分鐘、16oC 1分鐘。

2、家鴿性別特異性基因擴增

2.1 取用新的PCR 8聯管(96孔PCR板),按上述方式編號,然后用10l移液器在每管內分別加入9.5 l C 液;

2.2 用2.5l移液器從1.7中的8聯 PCR管內分別吸取0.5 l溶液,加入對應的已加有C液的管內,然后蓋上PCR管蓋。吸取新的樣本時請注意更換槍頭。

2.3 離心30秒鐘,將溶液都離心到PCR 8聯管底部

2.4 將8聯管(或PCR板)分別按順序依次放入PCR儀器內,按以下程序進行性別特異基因擴增:

95 oC 2 min

35  (95 oC 30 s, 56oC 30s, 72oC 40 s)

72 oC 10 min

16oC 儲存

3、電泳檢測

3.1 用電子天平秤取0.6克瓊脂糖,倒入100 ml三角燒瓶內, 加入60 ml D液;然后放入微波爐內加熱煮沸;待瓊脂糖溶解后,放室溫下冷卻至60 oC,加入3 l E 液,混勻后倒入凝膠制備板內,插上樣品梳。室溫冷卻30分鐘。

3.2 撥去樣品梳。用10l移液器吸取PCR擴增好的產品5 l 分別加入瓊脂糖凝膠的樣品孔內。

3.3 在充滿D液(可重復使用)的電泳槽內,以電壓120V,電泳13分鐘。

3.4 在紫外透射臺下進行觀察記錄。

4、性別判定

   出現兩個電泳條帶(其中較小電泳條帶較強,而較大條帶的較弱)的樣品對應的鴿子為雌性(如下圖標有F的為雌鴿),僅出現較大條帶對應的鴿子為雄性。如果未出現上述兩種條帶,則或者因為DNA模板制備出問題、或者PCR擴增時樣品因PCR管蓋子未蓋緊樣品揮發干而造成,需要對該樣品重新進行鑒定。

 

 

圖一、鴿子性別鑒定結果電泳圖。 標有F泳道對應的鴿子為雌性。其余為雄性。

 

 

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