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CAS9質粒系列

 

  CRISPR/Cas基因組編輯工具系統涉及到sgRNA和Cas9兩種成分。在細胞內,Cas9蛋白在單一的向導RNA(sgRNA)引導下識別并切割基因組上的目標靶位點,從而在基因組上人為定向制造出雙鏈斷裂(DSB)。DSB一旦形成,會激發細胞內源性的DNA損傷修復機制以修復DSB。細胞內的DNA修復包括非同源末端連接修復(NHEJ)、微同源介導的末端連接修復(MMEJ)和同源重組修復(HR)等三種主要形式。前兩種修復均為易錯修復,修復的結果是在DSB附近形成插入/缺失突變。如果插入/缺失突變是個移碼突變且發生在關鍵功能結構域對應的外顯子上,則可能使目標基因因移碼而不能編碼出有活性的蛋白,從而成為一種無效等位基因,結果導致基因敲除;如果同時向細胞內提供同源供體,則這些供體會有機會被當作用于DSB修復的同源供體,結果細胞通過HR修復,成功實現在指定位置的基因敲入。

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pYSY-T7-SpCas9

pYSY-T7-SpCas9

SpCas9原核表達質粒,T7/Cas9;人密碼子偏好性優化的spCas9
P-001
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pYSY-T7-SpCas9-P2A-eGFP

pYSY-T7-SpCas9-P2A-eGFP

SpCas9融合eGFP原核表達質粒,T7/Cas9-P2A-eGFP;人密碼子偏好性優化的spCas9
P-002G
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pYSY-T7-SpCas9-P2A-mCherry

pYSY-T7-SpCas9-P2A-mCherry

SpCas9融合mCherry原核表達質粒,T7/Cas9-P2A-mCherry;人密碼子偏好性優化的spCas9
P-002R
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pYSY-T7-SpCas9-P2A-Puromycin

pYSY-T7-SpCas9-P2A-Puromycin

SpCas9融合Puromycin原核表達質粒,T7/Cas9-P2A-Puromycin;人密碼子偏好性優化的spCas9
P-002P
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pYSY-CMV-SpCas9

pYSY-CMV-SpCas9

SpCas9真核表達質粒,CMV/Cas9;人密碼子偏好性優化的spCas9
P-003
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pYSY-CMV-SpCas9-P2A-eGFP

pYSY-CMV-SpCas9-P2A-eGFP

SpCas9融合eGFP真核表達質粒,CMV/Cas9-P2A-eGFP;人密碼子偏好性優化的spCas9
P-004G
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pYSY-CMV-SpCas9-P2A-mCherry

pYSY-CMV-SpCas9-P2A-mCherry

SpCas9融合mCherry真核表達質粒,CMV/Cas9-P2A-mCherry;人密碼子偏好性優化的spCas9
P-004R
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pYSY-CMV-SpCas9-P2A-Puromycin

pYSY-CMV-SpCas9-P2A-Puromycin

SpCas9融合Puromycin真核表達質粒,CMV/Cas9-P2A-Puromycin;人密碼子偏好性優化的spCas9
P-004P
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pYSY-T7-SpCas9-os

pYSY-T7-SpCas9-os

SpCas9原核表達質粒,水稻密碼子偏好性優化的spCas9
P-005P-005
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pYSY-35S-SpCas9-os

pYSY-35S-SpCas9-os

SpCas9植物細胞表達質粒,2×35S啟動子/Cas9,水稻密碼子偏好性優化的Cas9
P-006
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